本文原载于中华检验医学杂志,,38(03)
胸腹腔积液是胸腹腔脏器病变常见的临床表现，胸腹腔积液中发现恶性肿瘤细胞，可作为胸腹腔积液性质鉴别的主要依据。但传统依靠胸腹腔积液常规染色进行细胞学检测和生化检测的方法易受多种主客观因素的影响，且检出率低[1,2]，而病理诊断的应用由于制片原因等容易漏诊和误诊[3]，影响其在疾病诊断和治疗中的应用效率。DNA指数是用来综合评估细胞DNA含量的客观指标，通过与淋巴细胞DNA含量对比得到被测细胞DNA倍体情况，流式细胞术(flowcytometry，FCM)和全自动细胞图像(automatedcellimageanalyzer，AICM)均可通过计算DNA指数来判断细胞的增值情况，从而鉴定细胞的来源。本研究是用上述两种方法分别检测胸腹腔积液样本中沉渣细胞的DNA含量，探讨两种方法单独检测结果和联合检测结果鉴别胸腹腔积液沉渣细胞来源的敏感度、特异度和准确度。
材料与方法
一、样本来源
收集年8月至年6医院进行胸腹腔积液检查的患者例，男例，女85例，年龄15～82岁，平均年龄56.49岁。其良恶性根据临床诊断和病理细胞学检查确诊，并经X线检查，CT、MRI证实。其中例为临床确诊的癌症患者的样本，包括肺癌62例，45例其他肿瘤(间皮瘤8例、肝癌11例、结肠癌7例、乳腺癌肺转移7例、胃癌7例、淋巴瘤5例)。例癌症患者中，有肿瘤浸润或转移的患者87例。96例非肿瘤患者，包括肺部感染41例，胸腔积液28例，27例其他疾病(心包积液、肾功不全、肝脓肿、胸膜炎等)。所有患者均签署知情同意书。
二、方法
1．样本处理：
取新鲜的胸腹腔积液ml分两份，一份样本离心弃上清后经涂片离心(0×g，5min，20℃)(武汉兰丁医学高科技有限公司)制成薄层细胞片两张，经Fleugen染色后在AICM上进行DNA倍体含量测定。另一份样本经目尼龙筛过滤后，×g离心5min弃上清，生理盐水洗两次离心后的沉渣加μlRNA酶和2mlPI(荧光染料碘化丙啶)染液，避光放置20min后经流式细胞仪检测DNA倍体。在SPSS17.0软件采用ROC曲线分析FCM和AICM联合和单独的诊断价值，曲线下面积通过ROC绘图功能实现。
2．结果判定和处理：
正常细胞内有23对染色体或称二倍体，常用c(content)作为单位衡量DNA含量，1个c为正常G0/G1细胞DNA含量的一半，因此G0/G1细胞为2c细胞(2倍体细胞)，而G2/M细胞为4c细胞(4倍体细胞)，AICM是通过测定染色体细胞核的IOD(integratedopticaldensity)来判断细胞核的含量。并用DNA指数(DNAindex，DI)表示，正常G0/G1期DI为1，G2/M期DI为2，S期DI为1～2。按照国际标准[4]，当DI2.5时，提示细胞恶变的可能。在直方图和细胞点阵分布图的中，其阳性指征为5c细胞数3个或者有非整倍体细胞峰出现。而流式细胞仪同样以DNA指数(DI)表示，正常DNA指数为1.0±0.1，DI大于或者小于1.0±0.1都判定为异倍体。
结果
一、FCM检测DNA倍体的结果
流式细胞检测中，在份样本中有25份样本由于细胞含量少或者染色不佳等原因未获得有效的检测结果，份样本中98份恶性和80份良性样本的结果见表1。由表1得到的FCM检测的敏感度、特异度和准确度分别为78.6%、80.0%和79.2%。
表1
流式细胞术检测胸腹腔积液性质结果(份)
二、AICM分析仪检测DNA倍体的结果
用AICM检测份样本，其中有16份无检测结果，份检测样本中包括份恶性和84份良性样本，其检测结果分别见表2。表2得到细胞图像分析仪方法的敏感度、特异度和准确度分别为83.5%、78.6%和81.3%。
表2
全自动细胞图像检测DNA倍体结果(份)
三、FCM和AICM联合检测结果
FCM和AICM联合检测得到份检测结果中包括份恶性和80份良性样本，细胞涂片镜检检测得到个结果。其检测结果见下表3、表4和图1。表3得到的二者联合后检测的敏感度、特异度和准备度分别为92.2%、88.3%和89.6%，表4中细胞涂片镜检的结果分别为52.3%、71.8%和61.6%。
表3
流式细胞术和全自动细胞图像联合检测的结果(份)
表4
常规细胞涂片镜检检测的结果(份)
图1
两种方法单独和联合检测的ROC曲线
讨论
人体正常细胞的DNA含量在细胞所有参数中相对恒定，随着细胞周期而发生周期性的变化(G1期，S期，G2期，M期)[5]。一般而言，其含量的微小变化就会引起染色体形态和结构的异常，从而引起肿瘤的发生，因此染色体非整倍体作为肿瘤的潜在标志物[6,7,8]，其临床价值备受治疗白癜风哪家医院效果好治白癜风医院哪家比较好
